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(一)母种的制备 用试管制成斜面培养基，并接种原始试管种(保留种，并用于生产的母种)即为生产母种，可用于扩接原种。 1． 培养基配方 配方一 马铃薯培养基（PDA）马铃薯200克 蔗糖20克 琼脂20克 水1000毫升 配方二 综合马铃薯培养基 马铃薯 200克 葡萄糖20克 磷酸氢二钾3克 硫酸镁1.5克 维生素B1 10毫克 琼脂20克 水1000毫升 PH值自然 配方三 合成培养基 马铃薯 20克 葡萄糖20克 磷酸二氢钾2克 蛋白胨5克 酵母膏5克 硫酸镁1克 水1000毫升 PH值自然 2．培养基制作方法 先将马铃薯洗净去皮（挖去芽眼） 切成簿片，称取200克，加水1000毫升，煮沸15?20分钟，用4层纱布过滤，取其滤液补足水至1000毫升，加入琼脂20克，再加热，琼脂溶化后，再加入其它药品。 培养基的分装，应在培养基凝固前进行（琼脂培养基40℃凝固）一般用漏斗，或分装瓶，下端连接一段软橡皮管，橡皮管下面再连接一段玻璃管，在橡皮管上安装一个止水弹簧夹，分装时将玻璃管插入试管内，但不要碰到管壁，装入量为试管长度1/4。装好后塞上棉塞，用线绳捆扎起来，棉塞部分用报纸包扎。 3．灭菌 将试管直立放入高压蒸气灭菌锅，在1.1kg/C?压力下(锅入温度达121℃)灭菌30分钟使微生物包括芽孢全部杀死。待压力降到0时，慢慢放出锅内气体，趁培养基没有凝固时，将试管摆成斜面。 4．接种、培养 通过无菌操作方法将菌种接入试管斜面上，置28℃、3天后将温度降至24℃继续培养，7?15天左右，菌丝长满整个试管斜面，即成(生产)母种。 (二)原种、制备 母种接种到原种培养基上，进行扩大繁殖育种即为原种，原种一般采用广口瓶或袋装。 1．培养基配方 配方一 木屑麸皮培养基 阔树木 78% 麸皮 20% 糖 1% 石膏粉 1% 配方二 棉籽壳木屑培养基 棉籽壳 80% 木屑15% 糖 1% 麸皮 5% 过磷酸钙 3% 石膏粉 1% 2．拌料与装袋 选用新鲜无霉变原料，充分混匀，加水比例为1：1.3左右拌匀，总含水量60%-63%。含水量以手紧握培养料指缝间有水欲滴为宜。堆闷30分钟后，装瓶(袋)。用机械或人工装袋稍加压实，袋口用无棉盖体封口。 3．灭菌 灭菌方法有两种，高压灭菌和常压灭菌。高压灭菌又称加压蒸气灭菌，灭菌原理：在高温(121℃以上)、高压(1.1公斤/C?)条件下灭菌2小时，将芽孢在内的微生物全部杀死。常压灭菌称流通蒸气灭菌，由于灭菌设备、条件和基本因素的不同，温度变动在95-105℃之间，其热力、穿透力不强，在一定温度下要维持足够时间才能达到灭菌目的，通常在100℃下维持10-12小时。 4．接种与培养 不论用接种箱或接种室接种，在接种前，需对接种箱或接种室用0.2%的来苏水或漂白粉进行消毒处理，然后将灭菌过的料瓶(袋)放在箱内，用烟雾剂密闭薰蒸消毒。接种室消毒，一间房需点燃3盒50克规格烟雾剂；接种箱消毒每次用4克，一支母种试管可接4?6瓶(袋)原种。将接种后的菌种瓶(袋)放入发菌室黑暗处培养。培养室温度22-26℃，相对湿度70%以下，发菌期间应保持良好的通风条件。原种从接种到菌丝长满瓶(袋)需30?40天。 (三)栽培种制备 原种进一步扩繁，即为栽培种。栽培种一般采用塑料袋制备，用无棉盖体封口。一瓶原种可接50-60瓶(袋)栽培种。栽培种培养基配方及拌料、装袋、灭菌、接种、发菌管理与原种相同。
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